巨桉miR156 CRISPR/Cas9载体构建

编号 zgly0001645720

文献类型 期刊论文

文献题名 巨桉miR156 CRISPR/Cas9载体构建

作者 欧阳乐军  袁玉梅  李莉梅  陈剀钊  戴发 

作者单位 广东石油化工学院 

母体文献 森林与环境学报 

年卷期 2018年04期

年份 2018 

分类号 S792.39 

关键词 CRISPR/Cas9  同源重组  载体构建  基因编辑 

文摘内容 通过CRISPR/Cas9系统构建miR156家族中3个基因编辑载体(miR156A、miR156B和miR156C),为研究巨桉miR156家族基因的功能提供借鉴与参考。经聚合酶链式反应(PCR)扩增含靶基因的miR156A-gRNA、miR156B-gRNA和miR156C-gRNA,用BsaI酶切得到线性化的pHDE/Cas9载体后,经重组酶连接得到重组质粒。将重组质粒转化到DH5α感受态细胞,再对重组质粒进行PCR鉴定与测序比对分析。结果表明,利用同源重组的方法构建了带有筛选标记基因mcherry的巨桉miR156家族CRISPR/Cas9载体系统,插入序列无突变,与预期序列高度一致,重组子阳性率为100%。