一种拟南芥基因高效编辑体系研究

编号 zgly0001691256

文献类型 期刊论文

文献题名 一种拟南芥基因高效编辑体系研究

作者 欧阳乐军  马铭赛  陈梓洛  黄嘉玲  布梁灏  陈自银  李莉梅 

作者单位 广东石油化工学院生物工程学院 

母体文献 植物研究 

年卷期 2019年06期

年份 2019 

分类号 Q943.2 

关键词 CRISPR/Cas9  基因编辑  荧光筛选标记  as1 

文摘内容 CRISPR/Cas9基因编辑系统操作简单易行,无需引入外源基因,生物安全性高。但怎样快速筛选获得不含外源转化元件的基因编辑后代是一个关键技术问题。本研究创造性的将拟南芥种皮特异性启动子At2S3与荧光筛选标记基因m Cherry组装进植物基因组定点编辑CRISPR载体p HDE中,以拟南芥as1为靶基因,构建一种通过荧光标记筛选、实现转化后代中Cas9 Free的基因高效编辑体系。结果表明,通过同源重组方法构建的带有筛选标记的CRISPR载体与设计相符,外源插入片段正确。挑选转化后种皮上带有红色荧光标记的阳性种子培育得到T1代植株,经PCR验证,成功获得as1定点敲除的纯合突变植株,纯合子比率达到40%;挑选T1代纯合突变上不带荧光的种子,培育得到的T2代植株中,PCR检测不到Cas9片段,实现了编辑后代的Cas9 Free。本研究构建的一种带有可视化筛选标记的基因高效编辑体系,成功实现编辑后代中无外源插入的Cas9等转化元件,生物安全性高,为基因组定点编辑技术在植物遗传资源改良中的高效利用提供了借鉴与参考。