杨树微管功能研究植物表达载体构建及验证

编号 zgly0001695912

文献类型 期刊论文

文献题名 杨树微管功能研究植物表达载体构建及验证

作者 罗莹  张建国  刘晓霞  饶国栋  陆海 

作者单位 北京林业大学生物科学与技术学院  中国林业科学研究院林业研究所 

母体文献 林业科学研究 

年卷期 2020年01期

年份 2020 

分类号 S792.11  Q943.2 

关键词 微管蛋白  同源重组  载体构建  瞬时表达 

文摘内容 [目的]分别构建84K杨的微管蛋白TUA5和TUB16与红色荧光蛋白mCherry融合的植物过表达载体,瞬时表达验证载体在植物体内表达后的荧光信号,为研究杨树微管功能奠定基础。[方法]以毛果杨微管蛋白TUA5和TUB16的基因序列为模板,设计84K杨的TUA5和TUB16基因的引物,提取野生型84K杨的RNA并反转录成c DNA,同源克隆得到84KTUA5和84KTUB16基因,分别连接在pCAMBIA 1300载体mCherry荧光标签的N’端和C’端,转化到大肠杆菌TOP10感受态细胞中,通过菌落PCR和测序鉴定获得阳性单克隆,并通过电击法将重组质粒转化到农杆菌GV3101中,瞬时转化烟草后进行荧光观察。[结果]克隆得到了84KTUA5和84KTUB16基因,成功与pCAMBIA 1300-mCherry载体连接,烟草瞬时表达荧光观察结果显示:仅目的基因与mCherry标签C’端相连的融合蛋白能够成功表达,且荧光明显。[结论]成功构建了84K杨TUA5和TUB16基因与pCAMBIA 1300-mCherry的融合表达载体,为进一步研究杨树微管功能提供了背景材料。