羊口疮病毒B2L基因的原核表达、纯化及鉴定

编号 zgly0001555107

文献类型 期刊论文

文献题名 羊口疮病毒B2L基因的原核表达、纯化及鉴定

作者 李智  仲亮  白银荣  代兄  应海刚  张七斤 

作者单位 内蒙古农业大学兽医学院  巴林左旗农畜产品质量安全管理中心 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2017年09期

年份 2017 

分类号 S852.654 

关键词 羊口疮病毒  B2L基因  原核表达 

文摘内容 [目的]获取羊口疮病毒B2L基因编码蛋白。[方法]根据GenBank上羊口疮病毒ORFV/ShanXi/2011/China株B2L基因序列,设计并合成1对特异性引物,利用PCR方法扩增B2L全基因序列,然后将扩增的B2L基因克隆到PMD18-T载体上;对构建的重组克隆质粒(PMD18-T-B2L)经过测序鉴定后,将目的基因亚克隆到PET-32a(+)原核表达载体上,获得重组表达质粒PET-32a-B2L,然后通过双酶切和测序进行鉴定;将重组菌于37℃、终浓度含1 mM IPTG的LB培养基中,诱导表达3h后进行SDS-PAGE分析;表达的目的蛋白经过层析纯化后,进行Western Blot鉴定。[结果]原核表达重组质粒构建成功;SDS-PAGE鉴定发现目的条带的分子量与预期大小相符;纯化的目的蛋白经Western Blot鉴定正确,表明蛋白表达成功。[结论]本研究成功构建了羊口疮病毒B2L基因原核表达重组质粒,并成功表达和纯化了B2L蛋白,为后续羊口疮病毒检测方法的建立打下了基础。