微小隐孢子虫类钙调蛋白基因的克隆与原核表达

编号 zgly0001487598

文献类型 期刊论文

文献题名 微小隐孢子虫类钙调蛋白基因的克隆与原核表达

作者 杨晓娇  周鹏  米荣升  黄燕  石凯  王晓娟  王向佩  刘宇轩  雷晓思  陈兆国 

作者单位 中国农业科学院上海兽医研究所  农业部动物寄生虫学重点实验室  农业部动物产品质量安全生物性危害因子风险评估实验室(上海)  四川农业大学动物医学院  吉林农业大学动物科学技术学院 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2015年01期

年份 2015 

分类号 S852.723 

关键词 微小隐孢子虫  类钙调蛋白基因  克隆  原核表达 

文摘内容 为了对微小隐孢子虫(C.parvum)类钙调蛋白(CML)基因进行原核表达,分析重组表达蛋白的反应原性。以C.parvum卵囊cDNA为模板,用PCR方法扩增得到C.parvum CML基因。将CML基因连接到克隆载体pMD18-T,获得重组质粒pMD-CML,经限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,连接到经相同内切酶酶切的表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达。利用GST亲和树脂法纯化重组表达蛋白,对纯化的重组蛋白进行Western blot分析。结果表明,成功构建了重组原核表达质粒pGEX-CML,重组质粒转化菌经IPTG诱导后成功地表达出了分子质量约为51ku的重组蛋白rCML,纯化的蛋白rCML能与感染兔隐孢子虫(C.cuniculus)的兔血清发生特异性反应,具有很好的反应原性。