用λZAP Express作载体构建金针菇子实体表达型cDNA文库

编号 zgly0000305457

文献类型 期刊论文

文献题名 用λZAP Express作载体构建金针菇子实体表达型cDNA文库

作者 周凯松  常宁  彭俊峰  张晗星  张长铠 

作者单位 山东大学微生物技术国家重点实验室济南 

母体文献 菌物系统 

年卷期 2003,22(1)

页码 101-106

年份 2003 

分类号 S646.15  Q943 

关键词 滴度  重组率  免疫筛选  金针菇子实体  表达型cDNA文库  载体构建  火菇素 

文摘内容 采用(QuickPrep micro mRNA Purification试剂盒从新鲜金针菇子实体中快速提取、纯化mRNA,Time Saver cDNA Synthesis试剂盒逆转录成cDNA分子后，通过在cDNA分子两端加上EcoRⅠ/NotⅠ接头，在T4多核苷酸激酶的作用下磷酸化，与表达载体λZAP Express Predigested Vector连接，然后用包装蛋白在体外包装连接产物，感染及E.coli XL1-Blue MRF''''''''构建成表达cDNA文库。经检测：文库滴度为4．0×10^6pfu/ml，文库扩增后，滴度达2．0×10^10pfu/ml，重组率为90％，cDNA分子长度在0．3—3．5Kb范围。应用原位免疫杂交，初步筛选出火菇素相关基因的阳性克隆。