用λZAPExpress作载体构建金针菇子实体表达型cDNA文库

编号 zgly0001273561

文献类型 期刊论文

文献题名 用λZAPExpress作载体构建金针菇子实体表达型cDNA文库

作者 周凯松  常宁  彭俊峰  张晗星  张长铠 

作者单位 山东大学微生物技术国家重点实验室  山东大学微生物技术国家重点实验室 济南250100  济南250100  济南250100 

母体文献 菌物系统 

年卷期 2003年01期

年份 2003 

分类号 Q943 

关键词 滴度  重组率  免疫筛选 

文摘内容 采用QuickPrepmicromRNAPurification试剂盒从新鲜金针菇子实体中快速提取、纯化mRNA,TimeSavercDNASynthesis试剂盒逆转录成cDNA分子后,通过在cDNA分子两端加上EcoRⅠ/NotⅠ接头,在T4多核苷酸激酶的作用下磷酸化,与表达载体λZAPExpressPredigestedVector连接,然后用包装蛋白在体外包装连接产物,感染E.coliXL1-BlueMRF捁菇ǔ杀泶颿DNA文库。经检测:文库滴度为4.0×106pfu/ml,文库扩增后,滴度达2.0×1010pfu/ml,重组率为90%,cDNA分子长度在0.3-3.5Kb范围。应用原位免疫杂交,初步筛选出火菇素相关基因的阳性克隆。