用M13克隆系统建立牛传染性鼻气管炎病毒基因组无性繁殖系

编号 zgly0001098912

文献类型 期刊论文

文献题名 用M13克隆系统建立牛传染性鼻气管炎病毒基因组无性繁殖系

作者 吴时友  宫云浩  孙书华 

作者单位 农业部动物检疫所  农业部动物检疫所 

母体文献 动物检疫 

年卷期 1989年05期

年份 1989 

关键词 牛传染性鼻气管炎病毒  克隆系  无性繁殖系  基因组  空斑  重组率  动物检疫所  TE缓冲液  行标记  大肠杆菌 

文摘内容 用M13克隆系统对牛传染性鼻气管炎病毒进行克隆,获得14个重组体。用其中9.6kb片段制成的探针,可与IBRV—DNA进行杂交,证实已建立了IBRV基因组的无性繁殖系。 牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）属于疱疹病毒,它的基因组是线性双链DNA,约154kb（千碱基对）。 M13为丝状雄性特异的大肠杆菌噬菌体,它具有一个单链环状DNA基因组及蛋白外壳,当感染宿主细胞后,单链环状的基团组（ssDNA）转变为双链环状的复制型（（?）DNA）。M13DNA经改造已成为有效的克隆载体,并广泛地应用于核酸的序列分析及单链DNA探针。我们采用了M13mp作为克隆载体。改建的M13载体转染JM103细菌后可以产生有活性的β—半乳糖苷酶（Lac+）,在用IPTG诱生和用X-gal作为酶底物时可以形成蓝色空斑,在Lac DNA的多个单一酶切点序列中插入外源基因,就不能产生有活性的半乳糖苷酶,从而形成透明空斑,可以用这种正性标记挑选重组体。