可污染食品及饲料的产黄曲霉毒素真菌的多重PCR检测

编号 zgly0001330282

文献类型 期刊论文

文献题名 可污染食品及饲料的产黄曲霉毒素真菌的多重PCR检测

作者 秦文彦  程洁  应盛华  冯明光 

作者单位 浙江大学微生物研究所  浙江出入境检验检疫局技术中心  浙江大学微生物研究所 杭州310058  杭州310012  杭州310058 

母体文献 菌物学报 

年卷期 2007年03期

年份 2007 

分类号 Q93-33 

关键词 黄曲霉毒素  曲霉  青霉  快速检测体系  反应条件优化  特异性  灵敏性 

文摘内容 根据黄曲霉毒素生化途径中的关键调控基因aflR、omt-1和ver-1的序列以及真菌共有的5.8S rDNA的ITS序列分别设计ApaF/ApaR、OmtF/OmtR、VerF/VerR及ITS1/ITS4四对引物,研究建立产黄曲霉毒素真菌及其潜在饲料或食品污染的多重PCR快速灵敏检测体系。PCR扩增的4个DNA片段中,1032bp、797bp和600bp与基因库中对应基因或DNA序列的同源性达99%以上,仅452bp片段与对应基因ver-1的同源性为98%。通过优化主要影响因子,建立了快速检测产黄曲霉毒素真菌的单管多重PCR反应体系,并用于6种曲霉和1种青霉DNA样品的检测。结果显示,上述4个片段均平行地清晰出现在2株黄曲霉Aspergillus flavus和1株寄生曲霉A.parasiticus的DNA样品中,而其余菌种只检测到ITS片段,说明检测特异性很好。灵敏性分析表明,多重PCR检测的保守灵敏度为1ng/μL样品DNA,所有目标片段的条带均很清晰;即使DNA浓度降至0.1ng/μL,除aflR之外的所有条带也可分辨。