猪圆环病毒2型Taqman探针法实时荧光定量PCR检测方法的建立

编号 zgly0001650053

文献类型 期刊论文

文献题名 猪圆环病毒2型Taqman探针法实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者 石林  吴瑗  巴少波  刘正奎  陈琳  王磊  邵春艳  孙静  周莹姗  王晓杜  宋厚辉 

作者单位 浙江农林大学动物科技学院  金华职业技术学院农业与生物工程学院 

母体文献 浙江农林大学学报 

年卷期 2018年06期

年份 2018 

分类号 S852.651 

关键词 动物学  猪圆环病毒2型  实时荧光定量PCR  灵敏性  特异性  检测方法 

文摘内容 猪圆环病毒2型（PCV2）是一种引起仔猪Sus scrofa多系统衰竭综合征、免疫抑制、皮肤肾病综合征等疾病的病原体。根据GenBank中PCV2 ORF1基因序列设计合成特异性引物和探针,以PCV2基因组DNA为模板,通过聚合酶链式反应（PCR）扩增目的片段,并将目的片段克隆至pMD18-T载体,构建阳性标准品。以阳性标准品为模板,优化荧光定量PCR反应条件,建立标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性验证,并应用此方法对临床样品进行检测。结果表明:阳性质粒标准品构建成功,该检测方法的引物与探针的最佳浓度皆为0.2μmol·L-1,线性检测范围为2.1×10132.1×106拷贝·L-1,最低检测限值为8.828×106拷贝·L-1,且与其他相关疾病无交叉反应;各批次检测变异系数低,检测方法稳定性好。本研究建立的敏感性高、特异性好的实时荧光定量PCR方法,为PCV2的快速检测提供了新工具。