犬α干扰素的克隆、表达及纯化

编号 zgly0001383332

文献类型 期刊论文

文献题名 犬α干扰素的克隆、表达及纯化

作者 项黎丽  闫若潜  盛敏  程增青 

作者单位 济源市畜产品质量监测检验中心  河南省动物疫病预防控制中心  青岛易邦生物工程有限公司 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2010年01期

年份 2010 

分类号 S829.2 

关键词 犬α干扰素  克隆  表达  纯化 

文摘内容 根据DDBJ/GenBank基因库中已登录的犬α干扰素序列,设计了含SphⅠ和HindⅢ酶切位点的一对引物,采取聚合酶链式反应(PCR)技术以犬基因组DNA为模板进行了CaIFN-α的成熟肽基因的克隆,扩增产物与克隆载体pGEM-T Easy Vector连接后转入大肠杆菌JM109,经PCR鉴定和EcoRⅠ酶切鉴定,初步证实为CaIFN-α,用SphⅠ和HindⅢ双酶切重组质粒,将目的片段与表达载体pQE30连接,然后转入大肠杆菌JM109,经PCR鉴定、SphⅠ和HindⅢ双酶切鉴定、序列测定证实已经成功克隆了CaIFN-α,构建了重组表达质粒PQE30/CaIFN-α。将重组表达菌液培养至OD600为0.5时加入IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析CaIFN-α在大肠杆菌中得到了表达,表达的目的蛋白以包涵体形式存在,表达量约占细菌总量的20%左右。将诱导表达的菌液经超声裂解、变性、复性、透析后,得较纯的CaIFN-α蛋白。本研究为以后CaIFN-α的活性及临床应用研究奠定了基础。