蜡梅几丁质酶基因的克隆与原核表达

编号 zgly0000636241

文献类型 期刊论文

文献题名 蜡梅几丁质酶基因的克隆与原核表达

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 谢树章  秦平伟  张迷  胡雨晴  李名扬  眭顺照 

作者单位 西南大学园艺园林学院重庆市花卉工程技术研究中心  重庆市农业科学院生物技术研究中心 

母体文献 林业科学 

年卷期 2009,45(12)

页码 36-41

年份 2009 

分类号 S718.46  Q943.2 

关键词 几丁质酶  克隆  原核表达  蜡梅 

文摘内容 在构建好蜡梅花cDNA文库并进行EST分析基础上,通过随机克隆测序,得到1个蜡梅几丁质酶的cDNA基因,命名为Cpchia（GenBank登录号：FJ749130）。CpchiacDNA全长为1184bp,开放阅读框为954bp,编码317个氨基酸,其结构包括信号肽、几丁质结合域、可变交联区、催化区,无C端延伸区,为ClassⅠb型胞外几丁质酶,属于几丁质酶第19家族。将Cpchia克隆到原核表达载体pET-28a（＋）,在大肠杆菌BL2l细胞中以包涵体形式表达融合蛋白,利用透析法获得复性蛋白,其几丁质酶活性经DNS法检测达到200U.mL-1。酶活性和稳定性分析表明,试验条件下,pH7.0有利于酶的稳定和活性发挥,40℃活性最高,在0℃低温下也有较高活性。上述结果说明,分离的Cpchia基因编码蛋白具有几丁质酶活性,而且可能与蜡梅花的抗寒性形成有关。