棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶的原核表达及其协同增效作用

编号 zgly0000763599

文献类型 期刊论文

文献题名 棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶的原核表达及其协同增效作用

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 项林平  刘小芸  田强强  刘强  吕婷婷  王敦 

作者单位 植保资源与病虫害治理教育部重点实验室  西北农林科技大学林学院 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2011,39(2)

页码 87-91

年份 2011 

分类号 S476.13 

关键词 棉铃虫核型多角体病毒  几丁质酶  原核表达  增效作用 

文摘内容 【目的】在大肠杆菌中表达棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒(HearNPV)几丁质酶(Chi A),利用表达产物进行病毒增效作用研究,以明确杆状病毒Chi A对HearNPV的协同增效作用。【方法】用PCR方法扩增出不含N端信号肽编码序列的Chi A基因片段,分别克隆至原核表达载体pMAL-p2x和pET-32a中,构建重组表达载体,并分别在大肠杆菌TB1和BL21(DE3)中进行融合表达,测定融合蛋白对HearNPV的增效作用。【结果】克隆的基因片段经过测序后连接表达载体,成功构建了重组表达载体pMAL-p2x-Chi A和pET-32a-Chi A。重组载体转化相应菌株并进行诱导表达,发现pMAL-p2x-Chi A在大肠杆菌TB1中的表达量占细菌总蛋白的15.8%,其中20.0%为可溶性表达;pET-32a-Chi A在BL21(DE3)中的表达量占细菌总蛋白的26.8%,其中30.2%为可溶性表达。选用pET-32a-Chi A在BL21(DE3)中的表达产物作为增效蛋白,当表达的可溶性HearNPV Chi A的添加水平为1.0μg/mL时,其能够显著提高病毒毒力,棉铃虫的死亡率较对照提高36.6%。【结论】利用大肠杆菌表达的可溶性HearNPV Chi A,对HearNPV具有明显的增效作用。