核桃举肢蛾性信息素结合蛋白2的分子克隆和免疫荧光定位

编号 zgly0001486514

文献类型 期刊论文

文献题名 核桃举肢蛾性信息素结合蛋白2的分子克隆和免疫荧光定位

作者 李文海  黄兴龙  王敦  冯纪年 

作者单位 西北农林科技大学植保资源与病虫害治理教育部重点实验室 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2015年10期

年份 2015 

分类号 S436.64 

关键词 核桃举肢蛾  性信息素结合蛋白  原核表达  多克隆抗体  免疫荧光定位 

文摘内容 【目的】明确核桃举肢蛾Atrijuglans hetaohei Yang性信息素结合蛋白2(Ahet PBP2)在核桃举肢蛾触角中的分布。【方法】本研究提取羽化后3-4 d的核桃举肢蛾成虫触角总RNA并反转录合成c DNA,设计简并引物进行RTPCR获得c DNA片段,然后利用RACE技术获得Ahet PBP2全长c DNA序列。将去除信号肽序列的Ahet PBP2进行原核表达,重组蛋白经镍柱纯化并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。制备的多克隆抗体作为一抗对核桃举肢蛾触角进行免疫组化分析。【结果】Ahet PBP2基因c DNA序列全长923 bp,开放阅读框504 bp,共编码167个氨基酸,分子量为19.26 k D,等电点为5.47。1 mmol/L IPTG诱导10 h获得可溶性重组蛋白,Western blot结果表明重组蛋白诱导表达成功,ELISA检测显示抗体效价为1∶1 024 000。免疫荧光定位结果显示核桃举肢蛾成虫触角部分感器被Ahet PBP2抗体标记。【结论】核桃举肢蛾成虫触角的部分感器中可能存在Ahet PBP2,推测该部分感器具有感受性信息素的功能。