家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂5的多克隆抗体制备及组织表达分析

编号 zgly0001447888

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂5的多克隆抗体制备及组织表达分析

作者 李国胜  王彦云  王明慧  徐开遵  陈玉华  沈卫德  许雅香 

作者单位 现代丝绸国家工程实验室  苏州大学基础医学与生物科学学院  苏州大学蚕桑研究所 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2013年02期

年份 2013 

分类号 S881.2 

关键词 家蚕  丝氨酸蛋白酶抑制剂  原核表达  多克隆抗体  组织表达 

文摘内容 为探讨家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂5(Serpin-5)的功能,制备其多克隆抗体并分析该蛋白质在家蚕组织中的表达特征。克隆获得去除信号肽的家蚕serpin-5基因,该基因大小为1 140 bp,编码379个氨基酸残基,预测蛋白质分子质量42.6 kD,等电点6.02。构建用于原核表达的pET28a-serpin-5载体,并在E.coli BL21中进行重组蛋白的诱导表达。经SDS-PAGE分析表明重组家蚕Serpin-5蛋白多以包涵体的形式存在,纯化后的融合蛋白的分子质量与预测值相符。以此为抗原免疫昆明小鼠,Western blot检测制备的多克隆抗体具有较高的特异性,ELISA检测该多抗对免疫抗原的效价达到1∶24 000。在制备高效价抗体的基础上,通过Western blot检测家蚕Serpin-5蛋白在5龄第3天幼虫精巢、卵巢中的表达量较高,中肠次之,在丝腺、马氏管、脂肪体中的表达量较低。推测家蚕Serpin-5蛋白在生殖腺中的高表达可能与家蚕的生殖功能相关。