犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其抗原性分析

编号 zgly0001400786

文献类型 期刊论文

文献题名 犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其抗原性分析

作者 毕振威  王永山  范红结 

作者单位 江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心  南京农业大学动物医学院 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2011年05期

年份 2011 

分类号 S852.659.5 

关键词 犬瘟热病毒  核衣壳蛋白基因  昆虫细胞  真核表达  杆状病毒 

文摘内容 将非典型犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)的核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N)基因克隆到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHTA中,构建含N基因的重组供体质粒pFastBac-N,转化E.coli DH10Bac感受态细胞,经筛选获得含N基因的重组Bacmid DNA(rBacmid-N),脂质体法转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒vBacmid-N。用vBacmid-N感染昆虫细胞Sf9,免疫印迹(Western blot)分析,在62kDa处出现一条特异蛋白条带,与重组N蛋白的理论值相符合;间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescent assay,IFA)检测,vBacmid-N感染的昆虫细胞sf9出现特异绿色荧光。以纯化的重组N蛋白为抗原建立CDV抗体间接ELISA检测方法,犬CDV阳性血清A450大于0.40,而犬CDV阴性血清A450小于0.05,显示了良好的抗原特异性与稳定性。