铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因的克隆及在昆虫细胞中的表达

编号 zgly0001312917

文献类型 期刊论文

文献题名 铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因的克隆及在昆虫细胞中的表达

作者 曾铮  吴大洋  李春峰 

作者单位 农业部蚕桑学重点开放实验室  农业部蚕桑学重点开放实验室 重庆400716  重庆400716 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2006年03期

年份 2006 

分类号 Q789 

关键词 弹性蛋白酶  表达  杆状病毒  昆虫细胞 

文摘内容 以产弹性蛋白酶的铜绿假单胞菌基因组DNA为模板,经PCR扩增得到约1.5 kb的弹性蛋白酶基因,克隆到质粒pET28 a,连同其上游的6×H is序列转移到pBacPAK8构建成pBacPAK8-H is-E la转移载体。采用L ipofec-tin法,将载体pBacPAK8-H is-E la和亲本病毒BacPAK6共转染Sf21细胞,经空斑纯化分离得到重组病毒BacPAK6-E la。通过双酶切及单酶切鉴定证实弹性蛋白酶基因已插入到病毒基因组的多角体启动子下游,SDS-PAGE检测到在昆虫细胞中表达约34 kD的蛋白条带,以弹性蛋白为底物的生化反应证明了表达产物具有一定的生物学活性。研究结果为弹性蛋白酶的制备提供了新的方法。