家蚕类胰凝乳蛋白酶基因的发掘与表达特征分析

编号 zgly0000778688

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕类胰凝乳蛋白酶基因的发掘与表达特征分析

学科分类 220.3020;森林昆虫学

作者 龙菲菲  席建  张进  司马杨虎  徐世清 

作者单位 现代丝绸国家工程实验室  山东农业大学林学院 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2012,38(3)

页码 424-433

年份 2012 

分类号 S881.2 Q78 

关键词 家蚕  类胰凝乳蛋白酶  基因克隆  表达谱  原核表达 

文摘内容 类胰凝乳蛋白酶(CTLP)是鳞翅目昆虫幼虫中肠中的主要蛋白酶。基于构建的家蚕中肠等组织差异表达基因的SSH文库,发掘和克隆了一条新的家蚕类胰凝乳蛋白酶基因Ctlp(GenBank登录号: JQ081296)。该基因定位于18号染色体nscaf2901,靠近端粒,有5个外显子和4个内含子,全长cDNA序列976 bp,ORF为840 bp,编码279个氨基酸残基,信号肽序列1～18 aa(分值0.985),1～20 aa和50～100 aa区域为2个由内到外的跨膜螺旋,推测蛋白质相对分子质量为29 780.10,pI为8.75,蛋白质功能域(保守区)和分子进化分析显示其为丝氨酸蛋白酶家族的类胰凝乳蛋白酶。家蚕Ctlp基因具有在5龄幼虫中肠特异性高表达和伴随进食量增加而上调表达的特征,同时也具有性别差异性和熟蚕期特异性上调表达的现象,暗示CTLP可能具有促进消化以外的功能。构建pET32a-ctlp重组表达载体,SDS-PAGE分析和Western blot鉴定结果显示,重组蛋白在原核表达系统中的表达量较低。