红曲菌cDNA消减文库的构建

编号 zgly0001273605

文献类型 期刊论文

文献题名 红曲菌cDNA消减文库的构建

作者 赖卫华  许杨  熊勇华 

作者单位 教育部食品科学重点实验室南昌大学食品科学工程系  教育部食品科学重点实验室.中德联合研究院  教育部食品科学重点实验室.中德联合研究院 南昌330047  南昌330047  南昌330047 

母体文献 菌物系统 

年卷期 2003年03期

年份 2003 

分类号 Q789 

关键词 桔霉素  抑制性消减杂交  聚合酶链式反应 

文摘内容 应用抑制性消减杂交技术,构建红曲菌产桔霉素和不产桔霉素差异表达的cDNA消减文库。分别从产桔霉素和不产桔霉素的红曲菌丝体中提取mRNA,依次合成单链和双链cDNA,经酶切成大小为250~750bp的片断,将产桔霉素的cDNA分为两组,分别与两种不同的接头连接,再与不产桔霉素的红曲菌的cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR后,将产物与T/A载体连接构建成功cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,文库扩增后得到283个克隆,经PCR法快速测定,均得到250~750bp的插入片断。所构建的红曲菌cDNA消减文库为进一步筛选红曲菌中与产桔霉素性状相关的基因奠定了基础。