草莓FaUVR8基因的cDNA克隆、生物信息学分析及原核表达条件优化

编号 zgly0001529016

文献类型 期刊论文

文献题名 草莓FaUVR8基因的cDNA克隆、生物信息学分析及原核表达条件优化

作者 刘勇强  王熙然  叶云天  娄可飞  陈清  汤浩茹 

作者单位 四川农业大学园艺学院 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2016年11期

年份 2016 

分类号 S668.4  Q943.2 

关键词 草莓  FaUVR8  生物信息学  原核表达 

文摘内容 紫外线B(UV-B)对于植物生长发育具有重要调节作用,其中UV RESISTANCE LOCUS 8蛋白作为UV-B的光受体在植物响应UV-B过程中起关键作用。草莓是一种重要的经济果树,目前关于草莓的UV-B光受体报道较少。为研究草莓中UV-B受体蛋白,本研究采用同源克隆的方法获得‘丰香’草莓中编码UV-B光受体蛋白的c DNA序列,进行了生物信息学的分析并构建了原核生物表达载体p ET32a-UVR8,利用中心点响应面法优化了重组蛋白的诱导条件(包括诱导温度,IPTG浓度,菌液浓度和诱导时间)。结果表明:克隆得到了编码草莓UVR8蛋白的全长c DNA序列,命名为Fa UVR8,生物信息学分析表明该序列长1 317 bp,编码438个氨基酸,预测分子量为47.28 k D,等电点p I为5.85,重建蛋白质三维结构表明该蛋白包含7个β-片状螺旋结构;原核表达得到69.7 k D的融合蛋白,对四个诱导条件优化表明将工程菌培养至菌液OD600=0.7,加入浓度为0.55 mmol/L的IPTG,在27.72℃下诱导9 h,可获得最大量重组蛋白79μg/m L。研究结果可为后期寻找与Fa UVR8蛋白互作的下游蛋白,以及进一步开展其功能研究提供参考。