运用重叠延伸PCR技术构建在甘丙肽全长cDNA嵌入第二内含子的重构分子

编号 zgly0000702800

文献类型 期刊论文

文献题名 运用重叠延伸PCR技术构建在甘丙肽全长cDNA嵌入第二内含子的重构分子

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 雷小春  司苏晋  薛亮亮  刘田福 

作者单位 山西医科大学实验动物中心 

母体文献 生物技术通报 

年卷期 2010(4)

页码 156-160

年份 2010 

分类号 Q959.223 

关键词 重叠延伸PCR  甘丙肽  内含子  重构分子 

文摘内容 构建嵌入第二内含子的甘丙肽(Galanin,GAL)全长基因组cDNA的重构分子。通过RT-PCR扩增出cDNA编区的序列,分别从基因组中扩增出cDNA的5′和3′端部分非编码序列;使用重叠延伸PCR(overlap extention PCR,OE-PCR)方法将三个片段重叠获得全长cDNA序列;再将全长cDNA从第三外显子第15个碱基处分成两部分,分开的cDNA前半部分和后半部分以及第二内含子进行重叠延伸获得重构分子,含有第二内含子的甘丙肽(GAL)全长基因组cDNA;将重构分子连入pMDI9-Tsimple载体。电泳分析观察到清晰的重构分子片段;测序显示重构分子由所设计的序列组成,第二内含子插入的位置准确,且无移码。使用重叠延伸PCR能够成功在cDNA中插入内含子获得一段重构基因。