重叠延伸PCR法构建小菜蛾化学感受蛋白1基因突变体研究

编号 zgly0001412411

文献类型 期刊论文

文献题名 重叠延伸PCR法构建小菜蛾化学感受蛋白1基因突变体研究

作者 任珍珍  刘晶晶  柳晓磊  陈永  李珣  胡美英 

作者单位 华南农业大学昆虫毒理研究室 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2011年01期

年份 2011 

分类号 Q78 

关键词 小菜蛾  化学感受蛋白1  重叠延伸PCR  原核表达  同源建模  分子对接 

文摘内容 【目的】探索重叠延伸PCR法在昆虫化学感受蛋白基因点突变上的应用,研究半胱氨酸(Cys32)对小菜蛾(Plutella xylostella)化学感受蛋白1(PlxyCSP1)结合特性的影响。【方法】用计算机软件模拟PlxyCSP1上Cys32突变前后的蛋白三级结构以及与配体化合物的结合情况,确定点突变位点。根据扩增得到的PlxyCSP1序列设计并合成重叠引物,利用重叠延伸PCR法,将PlxyCSP1上的Cys32突变成色氨酸(Trp32),获得突变体PlxyCSP1-M。将突变后的基因与载体pET-32a(+)连接,转化大肠杆菌BL21(DE3)。【结果】分子对接图显示,配体可以顺利进入PlxyCSP1的结合口袋,而无法进入PlxyCSP1-M的结合口袋。结合能预测显示,配体化合物与PlxyCSP1的结合能均为正值,与PlxyCSP1-M的结合能均为0。突变后的重组质粒测序结果表明,Cys32(TGC)已突变为Trp32(TGG),经IPTG诱导,该菌表达了分子质量约为36 ku的融合蛋白。【结论】Cys32是影响PlxyCSP1结构和功能的重要氨基酸残基。Cys32突变为Trp32后,PlxyCSP1-M结合特性发生了变化,不能与配体化合物正常结合。