泛素样小蛋白4(SUMO4)的克隆、原核表达、纯化及鉴定

编号 zgly0000556541

文献类型 期刊论文

文献题名 泛素样小蛋白4(SUMO4)的克隆、原核表达、纯化及鉴定

作者 单黎然  杨振  安宁  宋振  郭泽坤 

作者单位 陕西省农业分子生物学重点实验室  西北农林科技大学生命科学学院 

母体文献 西北农林科技大学学报 

年卷期 2008,36(9)

页码 11-16

年份 2008 

分类号 Q785  Q786 

关键词 人类泛素SUM04  重叠延伸PCR  原核表达  蛋白纯化 

文摘内容 【目的】为人类泛素样小蛋白4(SUMO4)多克隆抗体制备和疾病研究奠定基础。【方法】根据Gen-Bank提供的核酸序列，设计7条单链DNA，采用重叠延伸PCR方法，合成SUM04基因编码区。基因片段经限制性内切酶双酶切，构建到表达载体pGEX-4T-1中。酶切、测序鉴定后，将重组子转染BL21 RIL菌株，表达及纯化融合蛋白。用SDS-PAGE和Western blot检测纯化效果，鉴定表达产物。【结果】成功合成了长度约为280bp的SUMO4基因，经双酶切鉴定，SUMO4原核表达载体构建成功，插入片段测序正确。GST-SUMO4融合蛋白在终浓度1mmol／L IPTG、28诱导5h后产量达到高峰，SDS-PAGE证实表达产物以可溶形式存在，分子量约为37ku，GST亲和层析的纯化效果良好，Western blot验证融合蛋白分子量与预期值相符。【结论】SUMO4蛋白在大肠杆菌中高效表达，并以可溶性蛋白形式存在。