切刻核酸内切酶PNE45的原核表达与活性鉴定

编号 zgly0001411813

文献类型 期刊论文

文献题名 切刻核酸内切酶PNE45的原核表达与活性鉴定

作者 梁亚峰  张超  王亚楠  范三红 

作者单位 西北农林科技大学生命科学学院  旱区作物逆境生物学国家重点实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2011年12期

年份 2011 

分类号 Q78 

关键词 PNE45  重叠延伸PCR  表达纯化  DNA切刻核酸酶 

文摘内容 【目的】对大肠杆菌噬菌体phiV10第45个基因编码蛋白PNE45进行原核表达,并检测其酶活性。【方法】设计并合成10段密码子优化的寡核苷酸序列,采用重叠延伸PCR技术,将其拼接克隆,获得人工合成的PNE45基因,然后将其整合入含有MBP纯化标签的pET21a原核表达载体中,构建重组载体pET21a-MBP-PNE45,诱导表达后获得融合蛋白MBP-PNE45。利用Amylose亲和层析纯化融合蛋白MBP-PNE45,以pUC19为底物,分别在Mg2+和Mn2+参与下对MBP-PNE45活性进行初步鉴定。【结果】融合蛋白MBP-PNE45主要以可溶性形式表达,其表达量占细胞总蛋白的35%左右。PNE45融合蛋白在Mg2+缓冲液中具有DNA随机切刻活性,在Mn2+存在时还具有切刻位点对位切刻活性。【结论】首次成功表达并制备了PNE45,并初步证明其是一种新的随机性切刻核酸酶。