LBD家族转录因子TtRa2和AtLBD37的表达与纯化

编号 zgly0000823776

文献类型 期刊论文

文献题名 LBD家族转录因子TtRa2和AtLBD37的表达与纯化

作者 王美艳  赵正阳  汤玮婧  陈志刚  奚绪光  范三红 

作者单位 西北农林科技大学生命科学学院 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2013(11)

页码 173-178

年份 2013 

分类号 Q943.2 

关键词 LBD家族转录因子  pHMT载体  表达纯化 

文摘内容 【目的】:由于LBD基因编码一类植物特有的空间结构尚未解析的转录因子, 拟建立2种LBD家族成员(TtRa2和AtLBD37)及其DNA结合结构域的高效表达与纯化体系, 为该家族转录因子的结晶研究奠定基础。【方法】:以pET21a表达载体为基架, 设计并构建了pHMT载体, 该载体在目标基因上游依次融合了His-tag、MBP和TEV蛋白酶酶切位点。将TtRa2和AtLBD37基因的完整编码区及其DNA结合结构域编码区分别插入pHMT载体, 获得重组质粒pHMT-AtLBD37、pHMT-AtLBD37-BD、pHMT-TtRa2、pHMT-TtRa2-BD。将上述质粒导入E.coli表达菌株2566诱导表达, 先使用amylose亲和柱纯化获得融合蛋白, 再用融合His-tag的TEV蛋白酶切除融合蛋白TtRa2-BD中的His6MBP双标签, 使用Ni-NTA亲和层析柱去除TEV蛋白酶和His6-MBP标签, 最后获得目标蛋白。【结果】:TtRa2和AtLBD37及其DNA结合结构域均获得了高效可溶性融合表达, 其表达量占细胞总蛋白的50%～70%; TtRa2-BD经2步亲和纯化后, 每升菌液可获得15 mg纯度大于98%的目标蛋白。【结论】:成功建立了2种LBD转录因子及其DNA结合结构域的高效表达和纯化体系。