等温扩增技术快速检测棕榈疫霉

编号 zgly0001501797

文献类型 期刊论文

文献题名 等温扩增技术快速检测棕榈疫霉

作者 戴婷婷  吴小芹 

作者单位 南方现代林业协同创新中心南京林业大学林学院 

母体文献 林业科学 

年卷期 2016年10期

年份 2016 

分类号 S763.1 

关键词 棕榈疫霉  环介导等温扩增  PpIGS  羟基萘酚蓝 

文摘内容 【目的】棕榈疫霉是农林业生产上的一种危害严重的病原菌,建立棕榈疫霉的快速分子检测技术对于预测疫病发生情况、及时采取有效的防治方法控制疫病的传播和流行、减少经济损失具有重要意义。【方法】采用环介导等温核酸扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）,建立了以基因间隔区（intergenic spacer,IGS）为靶标的快速、简单、特异和灵敏的棕榈疫霉菌的检测方法。以IGS基因为靶序列,利用环介导等温核酸扩增技术,设计了多组LAMP引物,同时建立并优化了LAMP反应体系与条件,最终筛选出1组扩增反应结果较好的LAMP引物,采用该组引物进行特异性、灵敏度和实际应用的验证。在扩增前加入染料羟基萘酚蓝（HNB）作为反应指示剂,根据HNB的颜色变化判定反应结果。【结果】整个检测过程在等温64℃条件下仅需80 min即可通过肉眼直接目测试验结果。在特异性试验中,通过HNB显色只有在棕榈疫霉菌株中能观察到天蓝色的阳性反应,而在其他疫霉、腐霉和真菌的供试菌株仍为紫色的阴性反应;在灵敏度试验中,PpIGS-LAMP技术检测灵敏度达到10fg.μL