盐生植物海马齿盐胁迫全长cDNA文库的构建与分析

编号 zgly0000707417

文献类型 期刊论文

文献题名 盐生植物海马齿盐胁迫全长cDNA文库的构建与分析

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 郑善清  段瑞军  郭建春 

作者单位 中国热带农业科学院热带生物技术研究所  海南大学农学院 

母体文献 基因组学与应用生物学 

年卷期 2010,29(1)

页码 155-159

年份 2010 

分类号 Q949.745.1 

关键词 海马齿  盐胁迫  SMART方法  全长cDNA文库 

文摘内容 为了研究盐生植物耐盐基因表达调控,本实验以海水浇灌的海马齿植株为供试材料,构建了盐胁迫下的全长cDNA文库。构建方法如下: 采用改良的CTAB法提取总RNA,SMART法反转录合成cDNA,LD-PCR方法合成双链cDNA。LD-PCR产物经蛋白酶K消化和SfiⅠ酶切后,经CHROMA SPIN+TE-1000分离柱子除去小片段DNA后,回收0.5kb以上的片段,按照适当的比例连接λTripIEX2载体。连接产物利用MaxPlaxTMLambda Packaging Extracts进行体外包装,得到海马齿初级cDNA文库。初始文库的独立克隆数为2.4×106pfu,初级文库滴度大于4.80×106pfu/mL,重组率为93.75%,插入片段为0.5～5kb,扩增文库的滴度为1.21×109pfu/mL,所得文库质量较高。本研究表明该cDNA文库适合于盐生植物海马齿相关基因的克隆和分析。