Bmo-miR-375-3p对家蚕丝素蛋白轻链基因BmFib-L表达的调控作用

编号 zgly0001528347

文献类型 期刊论文

文献题名 Bmo-miR-375-3p对家蚕丝素蛋白轻链基因BmFib-L表达的调控作用

作者 范洋洋  钱平  沈兴家  王欣  蒋涛  唐顺明 

作者单位 江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑生物学与生物技术重点实验室  中国农业科学院蚕业研究所农业部蚕桑遗传改良重点实验室 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2016年10期

年份 2016 

分类号 S881.2 

关键词 家蚕  miRNA  bmo-miR-375-3p  丝素轻链基因  P25基因  基因表达调控 

文摘内容 【目的】探究家蚕Bombyx mori miRNAs对丝素蛋白轻链基因(fibroin light chain gene,Bm FibL)和P25蛋白基因Bm P25表达的调控作用。【方法】分别以Bm Fib-L和Bm P25 mRNA 3’UTR为靶序列,应用在线预测软件RNAhybrid从前期家蚕4和5龄幼虫后部丝腺(posterior silk gland)sRNA高通量测序获得的29个差异表达bmo-miRNAs中,筛选对Bm Fib-L和Bm P25具有调控作用的候选bmo-miRNAs;采用半定量RT-PCR方法在mRNA水平分析候选bmo-miRNAs及其靶基因Bm Fib-L和Bm P25在4和5龄幼虫期以及5龄第3天幼虫不同组织的表达水平;利用双荧光报告基因检测系统在家蚕细胞Bm N中验证候选bmo-miRNAs对Bm Fib-L和Bm P25表达的调控作用。【结果】筛选到一个在Bm Fib-L和Bm P25 mRNA 3’UTR上都有靶位点的bmo-miR-375-3p(曾称bmo-miR-375*)。在后部丝腺中bmo-miR-375-3p和其预测靶基因Bm Fib-L和Bm P25都有较高的表达水平,提示bmo-miR-375-3p具备调控Bm Fib-L和Bm P25表达的时空条件。miR-375-3p重组表达载体与融合了Bm Fib-L 3’UTR的萤火虫荧光素酶(luciferase)报告基因(luc)表达载体共转染Bm N细胞,报告基因luc的表达水平显著下降;而在miR-375-3p重组表达载体与融合了Bm P25 3’UTR的luc表达载体共转染Bm N细胞中报告基因luc的表达水平下降不显著。【结论】miR-375-3p显著下调Bm Fib-L基因的表达,而对Bm P25基因的表达无明显调控作用。