氨基脲单克隆抗体制备及其ELISA检测方法的建立

编号 zgly0001362754

文献类型 期刊论文

文献题名 氨基脲单克隆抗体制备及其ELISA检测方法的建立

作者 姚嘉赟  沈锦玉  郝贵杰  徐洋  潘晓艺  尹文林 

作者单位 浙江省淡水水产研究所 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2009年09期

年份 2009 

分类号 S948 

关键词 氨基脲  人工抗原  单克隆抗体  间接ELISA 

文摘内容 以氨基脲(SEM)和对醛基苯甲酸(CP)为原料合成半抗原(CP-SEM),将半抗原和载体蛋白偶联后免疫Balb/C小鼠,应用杂交瘤技术建立稳定分泌抗氨基脲的杂交瘤细胞株。常规制备腹水,用辛酸-硫酸铵法纯化,并对纯化的mAb进行特异性鉴定。通过对不同抗体组合的分析和条件的优化,建立检测氨基脲的间接竞争ELISA方法。利用对醛基苯甲酸衍生草鱼肌肉提取的氨基脲,用建立的ELISA方法进行检测,并计算回收率和最低检测限。经细胞融合、筛选及克隆化,共获得7株稳定分泌抗氨基脲的杂交瘤细胞株,其中4株亲和力较高。建立了间接竞争ELISA检测方法,该方法灵敏度达到0.1ng/mL,平均回收率为98.47%,在草鱼组织中的最低检测限为0.76ng/g,回收率为70.55-100.56%,可用于肌肉中氨基脲残留的检测。