磁珠富集法分离柿微卫星标记

编号 zgly0000556641

文献类型 期刊论文

文献题名 磁珠富集法分离柿微卫星标记

作者 阮小凤  Gabi  Krczal  杨勇 

作者单位 西北农林科技大学园艺学院  莱茵兰普法尔茨州植物研究所 

母体文献 西北农林科技大学学报 

年卷期 2008,36(5)

页码 97-102

年份 2008 

分类号 S188  S665.202.4 

关键词 柿  微卫星  磁珠富集 

文摘内容 【目的】分离柿属植物的微卫星标记,为柿种质资源的分类、进化等遗传研究奠定基础。【方法】提取磨盘柿(Diospyros kaki)基因组DNA后,用EcoRⅠ和MesⅠ2种内切酶酶切并连接接头,再用接头特异引物进行PCR扩增。扩增产物与生物素标记的(GA)15和(AC)15探针杂交,杂交复合物用链亲和素包裹磁珠进行结合,得到单链DNA目标片段,经PCR扩增,连接pGEM-T载体,转化入感受态大肠杆菌,得到微卫星富集小插入片段DNA文库。用Colony-PCR法筛选阳性克隆,进行测序分析。【结果】测序96个克隆,54个含微卫星序列,24个为有效微卫星序列,其中完美型(perfect)9个,占37.5%;非完美型(imperfect)7个,占29.2%;混合型(compound)8个,占33.3%(。GA)n重复最为常见。21条含微卫星序列已登录GenBank(Accession Number：EF567396～EF567416)。成功设计21对引物,经初步筛选,14对表现出多态性。【结论】试验方法分离柿基因组微卫星简便有效,得到的多态性引物可用于柿种质资源的遗传研究。