家蚕具有CHCH结构域的蛋白家族基因BmCH的原核表达和亚细胞定位

编号 zgly0001410142

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕具有CHCH结构域的蛋白家族基因BmCH的原核表达和亚细胞定位

作者 舒建洪  梁莉惠  郑青亮  牛伟涛  张耀洲 

作者单位 浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所  浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室  邢台学院生化系 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2011年02期

年份 2011 

分类号 S881.2 

关键词 家蚕  CHCH保守结构域  基因克隆  荧光定量PCR  Westernblotting分析  细胞定位 

文摘内容 含有CHCH保守结构域的蛋白在不同物种中行使不同的功能。从家蚕蛹cDNA文库筛选获得一条cDNA序列,经生物信息学分析发现其编码蛋白含有一个CHCH保守结构域,将该基因命名为BmCH(GenBank登录号:DQ443425.1)。该序列开放阅读框大小为435 bp,编码144个氨基酸残基。将成功构建的重组质粒pET-28a(+)-BmCH转化到E.coli Rosetta(DE3)菌株,经IPTG诱导表达BmCH融合蛋白,用亲和层析进行纯化后,将融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。通过Westernblotting检测BmCH在家蚕4个发育时期和5龄幼虫组织中的表达情况与用荧光定量PCR检测BmCH在家蚕不同发育时期及5龄幼虫组织中的转录结果基本一致:该蛋白在卵、幼虫、蛹、蛾4个发育时期均有表达,其中在5龄幼虫期的表达量最高;该蛋白在5龄幼虫的表皮、精巢、中肠、丝腺和卵巢中有明显表达,在血淋巴、马氏管、脂肪体中的表达量较少,但差异不大,而在气管和头部没有表达。利用抗体的免疫荧光标记对BmCH在家蚕BmN细胞中的定位进行研究,观察到该蛋白主要分布在细胞质中。初步推测BmCH可能是家蚕生长发育的必需蛋白,参与多种细胞生命活动的过程。