家蚕JAB1/CSN5蛋白的基因克隆表达及亚细胞定位

编号 zgly0001361134

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕JAB1/CSN5蛋白的基因克隆表达及亚细胞定位

作者 许红  姚斐  盛清  吕正兵  陈健  聂作明  王丹  刘立丽  沈红丹  舒建洪  舒特俊  陈剑清  吴祥甫  张耀洲 

作者单位 浙江理工大学生物化学研究所浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室  中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2009年03期

年份 2009 

分类号 S881.2 

关键词 家蚕  COP9信号复合体  JAB1/CSN5蛋白  基因克隆  序列分析  荧光定量PCR  亚细胞定位 

文摘内容 JAB1/CSN5是COP9信号复合体(constitutive photomorphogenic signalosome CSN)的第5个亚基,内嵌的JAMM基序是CSN参与蛋白的泛素化降解途径并调控生物体生长发育过程的异构酶活性位点。在家蚕蛹cDNA文库中筛选到的一条基因序列,其ORF长度为1047 bp,预测编码蛋白含有JAB1/CSN5保守结构域JAB-MPN,因此命名为BmJM。将BmJM基因的ORF插入到载体pET-28a(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28a(+)-BmJM,于E.coliRosetta菌中进行原核表达,重组蛋白以包涵体形式存在。以纯化后的重组蛋白为抗原免疫大白兔获得BmJM的多克隆抗体,采用RT-PCR、Western blotting方法对BmJM基因在家蚕不同发育时期和组织中的转录及蛋白表达水平进行分析,发现BmJM蛋白在家蚕5龄幼虫的生殖腺表达量最高,而在其他组织中表达量较少,由此初步揭示了JAB1/CSN5在家蚕生长发育过程中的作用。亚细胞定位测定表明BmJM蛋白在细胞质近核区域含量最高,在细胞核中也有分布。