人Fas N 端融合蛋白的原核表达、纯化及初步分析

编号 zgly0000598631

文献类型 期刊论文

文献题名 人Fas N 端融合蛋白的原核表达、纯化及初步分析

作者 季韶洋  张祥雪 

作者单位 北京林业大学理学院 

母体文献 生物技术通讯 

年卷期 2008,19(4)

页码 518-521

年份 2008 

分类号 Q78 

关键词 Fas  原核表达  蛋白质纯化  圆二色谱 

文摘内容 目的：对Fas蛋白N端的30～108位肽段进行原核表达,制备可溶性蛋白,并完成二级结构分析。方法：利用BLAST程序进行同源性分析,确定所要构建的FasN端半胱氨酸富集结构域(CRD),PCR扩增目的基因片段,将其克隆入表达载体pGEX-6P-1,并转化大肠杆菌BL21(DE3),于16℃用0.2mmol/L的IPTG诱导25h表达GST-Fas融合蛋白;用Glu-tathione Sepharose 4B柱分离GST-Fas融合蛋白,用PreScission蛋白酶切去GST标签,将洗脱的蛋白样品经Superdex 75凝胶预装柱进一步纯化;对所获得的可溶性、高纯度蛋白进行圆二色谱分析。结果与结论：获得重组质粒pGEX-6P-1-fas,并在大肠杆菌中可溶性表达了FasN端CRD功能结构域蛋白;经亲和层析、酶切、分子筛层析后,获得了可溶的、高纯度的FasN端CRD功能结构域蛋白;圆二色谱结果揭示目标蛋白富含β-折叠,为进一步研究Fas的结构和功能奠定了基础。