人Tnfrsf11b—N端多肽的原核表达、纯化及其初步分析

编号 zgly0000600561

文献类型 期刊论文

文献题名 人Tnfrsf11b—N端多肽的原核表达、纯化及其初步分析

作者 季韶洋  张祥雪 

作者单位 北京林业大学理学院 

母体文献 中国骨质疏松杂志 

年卷期 2008,14(3)

页码 154-158

年份 2008 

分类号 Q78 

关键词 TNFRSF11B  骨保护素  原核表达  蛋白质纯化  圆二色谱 

文摘内容 目的对原核表达和可溶性纯化后的Tnfrsf11b蛋白氨基端的24．106位肽段进行二级结构分析。方法根据已经发表的人Tnfrsf11b氨基酸序列，利用BLAST程序进行同源性分析，确定所要构建的Tnfrsf11bN端CRD功能结构域；将目的基因片段克隆入表达载体pGEX-6P-1并转化大肠杆菌BL21(DE3)，于16℃、0．1mmol／LIPTG诱导25—30h可获得可溶性融合蛋白，经过Glutathione Sepharose^TM 4B亲和层析纯化和PreScission Protease酶切，洗脱的蛋白样品经过Superdex75凝胶预装柱进一步纯化，最终获得可溶性、高纯度的蛋白；对目标蛋白进行圆二色谱分析。结果获得重组质粒pGEX-6P-1-tnfrsf11b并在大肠杆菌中可溶性表达，经亲和层析、酶切、分子筛层析后获得了可溶的、高纯度的Tnfrsf11bN端功能结构域蛋白并对其进行了圆二色谱分析，发现目标蛋白富含β-sheet。结论高含量的β—sheet更有利于蛋白质参与与相互作用，这对其功能的发挥有着重要意义；对此进行研究可以更好的理解这种相互作用，并为进一步研究Tnfrsf11bN端的结构和功能奠定了基础。