腺伴随病毒介导绿色荧光蛋白基因对体外培养的鼠视网膜神经节细胞转染的实验研究

编号 zgly0000409186

文献类型 期刊论文

文献题名 腺伴随病毒介导绿色荧光蛋白基因对体外培养的鼠视网膜神经节细胞转染的实验研究

作者 李海燕  赵家良  张华 

作者单位 中国协和医科大学中国医学科学院北京协和医院眼科  上海爱尔眼科医院 

母体文献 眼科新进展 

年卷期 2006,26(10)

页码 737-739

年份 2006 

分类号 R774.1  Q959.836 

关键词 重组腺伴随病毒载体  绿色荧光蛋白  视网膜神经节细胞  细胞转染 

文摘内容 目的评价重组腺伴随病毒载体介导的绿色荧光蛋白基因(reoombinant adenoassociated vires—mediated green fluorescence protein, rAAV—GFP)对体外培养的鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells, RGCs)的转染效率和安全性。方法取出生24h内的SD乳鼠的视网膜神经上皮层, 行视网膜神经细胞的体外混合培养; 培养2d后, 按转染倍数(multiple on infection, MOI)为10、10^2、10^3、10^4、10^5对细胞进行转染; 5d后行流式细胞仪检测细胞表达绿荧光的比率, 并应用PE—Thy1.1抗体标记RGCs, 评价不同MOI的rAAV-GFP对RGCs的转染效率。应用MTT比色方法检测各组细胞的生长活性。结果MOI为10、10^2、10^3、10^4、10^5时, 对混合培养的全体细胞的转染效率分别为6.4%、15.6%、20.2%、45.1%和65.8%, 其中对RGCs的转染效率分别为11.7%、22.5%、27.7%、52.0%和75.3%; rAAV-GFP转染RGCs后, 细胞生长状态正常; MTT比色结果显示, 各转染细胞和未转染细胞的光吸收值无显著性差异(P〉0.05)。结论rAAV作为体外培养的SD乳鼠RGCs转染的载体是安全可行的, 且对细胞生长无明显影响。