小菜蛾NanosO基因启动子的克隆及功能验证

编号 zgly0001659876

文献类型 期刊论文

文献题名 小菜蛾NanosO基因启动子的克隆及功能验证

作者 王亚军  黄宇萍  于慧慧  徐雪娇  杨广  艾倩倩  尤民生 

作者单位 福建农林大学生命科学学院闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室  福建农林大学应用生态研究所  福建农林大学教育部害虫生态防控国际合作联合实验室 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2018年12期

年份 2018 

分类号 S433.4 

关键词 小菜蛾  NanosO  生殖腺特异性启动子  表达质粒  细胞转染 

文摘内容 【目的】克隆小菜蛾Plutella xylostella NanosO基因PxnosO启动子,并验证其具有生殖腺特异性活性,以期应用于基因功能研究或转基因昆虫的构建,为小菜蛾等农业害虫的综合治理提供新的研究思路。【方法】根据小菜蛾基因组序列信息,利用PCR技术克隆NanosO的启动子并进行序列分析。构建PxnosO-EGFP表达质粒,利用脂质体细胞转染技术将PxnosO-EGFP和IE1-EGFP表达质粒转入到小菜蛾胚胎细胞系(Px-6)和草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda卵巢细胞系(Sf9)中,通过激光共聚焦荧光显微镜观察和qRT-PCR技术分别定性和定量分析EGFP基因的表达,验证小菜蛾NanosO启动子的活性。【结果】克隆获得小菜蛾PxnosO(Px004767)启动子区序列,长1 743 bp。对启动子序列进行分析,发现该序列不仅包含启动子共有核心元件TATA box以及上游启动子成分CAAT box和GC box等,还包含有数十个转录因子结合位点。利用细胞转染技术,在PxnosO启动子驱动下成功地在Px-6和Sf9细胞系中表达外源基因EGFP。【结论】克隆了小菜蛾NanosO基因PxnosO启动子,在细胞水平上验证其能驱动外源EGFP基因的表达,为分析PxnosO在小菜蛾不同发育时期的表达模式和PxnosO启动子在体内的功能验证奠定基础。