猪TGEV HN-2012株ORF3a和ORF3b基因遗传变异分析及其真核表达研究

编号 zgly0001534751

文献类型 期刊论文

文献题名 猪TGEV HN-2012株ORF3a和ORF3b基因遗传变异分析及其真核表达研究

作者 曹贝贝  兰培英  韩丽  刘玲玲  韦学雷  胡慧 

作者单位 河南农业大学牧医工程学院  河南省动物性食品安全重点实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2016年04期

年份 2016 

分类号 S852.65 

关键词 TGEV河南分离株(HN-2012)  ORF3a和ORF3b基因  293T细胞  真核表达 

文摘内容 【目的】研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)HN-2012株ORF3a和ORF3b基因的遗传变异情况。【方法】根据GenBank公布的猪传染性胃肠炎病毒ORF3a和ORF3b基因序列,分别设计合成1对特异性引物,通过RTPCR从猪传染性胃肠炎病毒HN-2012株的cDNA中扩增ORF3a和ORF3b基因,经克隆测序后,将其基因序列与NCBI中不同来源的TGEV毒株的相应序列进行同源性分析,构建系统进化树并进行遗传变异分析,然后将ORF3a和ORF3b基因亚克隆至真核表达载体,构建pCAGGS-ORF3a-flag和pCAGGS-ORF3b-flag载体,转染293T细胞进行表达,利用flag标签抗体对2个基因的蛋白表达情况进行Western blot分析。【结果】TGEV HN-2012株的ORF3a基因与其他毒株间核苷酸的同源性为92.6%~100%,ORF3b基因与其他毒株间核苷酸的同源性为98.6%~99.7%。Western blot结果表明,ORF3a蛋白和ORF3b蛋白的分子质量约为8ku和28ku。【结论】TGEV HN-2012株的ORF3a基因与CH/JLY2/08、CH/HLJH/08株等亲缘关系较近,ORF3b基因与TS株、Miller M6株等亲缘关系较近,与我国其他毒株关系较远;成功实现了ORF3a和ORF3b蛋白在293T细胞中的表达。