柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3在293T细胞中的表达研究

编号 zgly0001459882

文献类型 期刊论文

文献题名 柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3在293T细胞中的表达研究

作者 王晔  韩红玉  董辉  姜连连  赵其平  朱顺海  薛璞  舒凡帆  黄兵 

作者单位 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2013年06期

年份 2013 

分类号 S852.723 

关键词 柔嫩艾美耳球虫  钙依赖蛋白激酶3基因  293T细胞  真核表达 

文摘内容 为构建柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3(Eimeria tenella calcium-dependent protein kinases 3,EtCDPK3)基因的重组质粒pCAGGS-EtCDPK3,并转染293T细胞进行表达,以柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA为模板,经PCR扩增其含完整开放阅读框的序列,将其克隆至pGEM-T easy载体,构建pGEM-Teasy-EtCDPK3重组质粒,双酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建真核重组表达质粒pCAGGS-EtCDPK3。该重组质粒经酶切和测序鉴定正确后转染293T细胞进行表达,分别用免疫印迹和间接免疫荧光鉴定EtCDPK3基因的表达情况。结果显示所构建的真核重组表达质粒pCAGGSEtCDPK3经过双酶切鉴定,可见1条大小约为1302 bp的目的条带,测序结果与实验室已获得的EtCDPK3序列完全一致;Western blot结果可见大小约为49 kDa的目的蛋白条带,间接免疫荧光实验可以检测到红色荧光。这些研究结果表明已成功构建了EtCDPK3的真核重组表达质粒pCAGGS-EtCDPK3,并在真核细胞中获得表达,为深入研究EtCDPK3的功能和制备DNA疫苗奠定了基础。