以18S rRNA为内参照的多重RT-PCR检测3种百合病毒

编号 zgly0001311995

文献类型 期刊论文

文献题名 以18S rRNA为内参照的多重RT-PCR检测3种百合病毒

作者 王冲  陈集双  洪健  杜志游  张华荣  陈绍宁 

作者单位 浙江理工大学生物工程研究所  浙江大学实验中心  浙江理工大学生物工程研究所 杭州310018  杭州310018  杭州310029 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2006年03期

年份 2006 

分类号 S436.8  S436.44 

关键词 百合病毒  内参照  多重RT-PCR  18SrRNA  分子检测 

文摘内容 本研究对多重PCR体系各成分和循环参数进行了摸索和优化,建立了以18S rRNA为内参照的同时检测3种百合病毒的多重RT-PCR体系,所检测的3种病毒是黄瓜花叶病毒(CMV)、百合斑驳病毒(LMoV)和百合无症病毒(LSV)。它们为侵染我国百合的主要病毒。在RT反应体系中加入3种病毒和18S rRNA的特异性反向引物的混合物,使反应体系中各反向引物终浓度均为0.5μmol/L,反转录酶(AMV)反转录合成各病毒和18S rRNA的互补第一链cDNAs。多重RT-PCR条件实验显示:将标准RT-PCR体系中的TaqHS DNA聚合酶量改为0.100 U/μL,Mg2+浓度改为4.0 mmol/L,各引物浓度选择0.2μmol/L,那么25个循环反应以上就能在一个反应管中以18S rRNA为内参照同时检测百合中的3种常见病毒。用该体系检测了10个百合样品,同时与32P同位素标记膜杂交检测作对照,结果显示,该检测体系检测灵敏度更高。