乐都紫皮大蒜4种病毒多重RT-PCR检测技术的建立

编号 zgly0001747826

文献类型 期刊论文

文献题名 乐都紫皮大蒜4种病毒多重RT-PCR检测技术的建立

作者 张超  董怡衡  岳苗  卫唯  张谦  王乐  尹卫  王煜伟  梁健 

作者单位 青海大学省部共建三江源生态与高原农牧业国家重点实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报:自然科学版 

年卷期 2023,51(1)

页码 120-129

年份 2023 

分类号 S633.4  S432.41 

关键词 乐都紫皮大蒜  病毒检测  多重RT-PCR  洋葱黄矮病毒  大蒜潜隐病毒  大蒜D病毒  大蒜X病毒 

文摘内容 【目的】建立乐都紫皮大蒜4种病毒的多重RT-PCR快速检测方法,为大蒜病毒病病原鉴定、脱毒效果验证等提供技术支撑。【方法】根据乐都紫皮大蒜RNA全长转录组测序结果,分别设计洋葱黄矮病毒(onion yellow dwarf virus,OYDV)、大蒜潜隐病毒(garlic latent virus,GLV)、大蒜D病毒(garlic virus D,GarVD)和大蒜X病毒(garlic virus X,GarVX)4种病毒的外壳蛋白特异性引物,筛选不同引物,优化引物用量、模板用量、退火温度等条件,并进行了多重RT-PCR的灵敏度检测和12份引进栽培大蒜种质资源的病毒检测。【结果】通过优化筛选,在一个PCR反应体系中实现了OYDV(1232 bp)、GLV(831 bp)、GarVD(506 bp)和GarVX(116 bp)4种病毒的多重检测,最优反应条件为退火温度55℃,模板用量2.5μL,混合引物用量1.0μL。多重RT-PCR的灵敏度略低于单一RT-PCR。对引进的12份栽培大蒜资源进行4种病毒的多重RT-PCR检测发现,有5份资源存在4种病毒,4份资源存在2种病毒,3份资源存在1种病毒。对7份资源中经多重PCR未检测到的病毒,使用单一RT-PCR进行检测和验证发现,除1份内蒙古资源(NMG)的1种病毒(GarVX)外,多重RT-PCR结果与单一RT-PCR检测结果一致。【结论】本研究建立的大蒜多重RT-PCR体系可靠性强,可用于大蒜病毒的检测与防控。