垂穗披碱草ISSR反应体系的正交优化

编号 zgly0001618718

文献类型 期刊论文

文献题名 垂穗披碱草ISSR反应体系的正交优化

作者 刘新亮  德英  赵来喜 

作者单位 中国农业科学院草原研究所  中国农业科学院研究生院 

母体文献 草业科学 

年卷期 2011年05期

年份 2011 

分类号 S543.9 

关键词 垂穗披碱草  ISSR-PCR  正交优化 

文摘内容 以垂穗披碱草(Elymus nutans)基因组DNA为模板,对ISSR-PCR反应体系中5个因素(TaqDNA聚合酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物)进行优化试验,建立垂穗披碱草稳定的ISSR-PCR反应体系及最佳扩增程序。在25μL反应体系中,最佳反应体系为2.5μL 10×buffer(不含Mg2+)、1.0 U Taq酶、2.0 mmol/L Mg2+、30～120ng模板DNA、0.25 mmol/L dNTPs、0.25μmol/L引物。在优化体系的基础上筛选出11条多态性丰富,扩增稳定的引物,并通过设置退火温度梯度、循环次数梯度、延伸时间梯度,得到垂穗披碱草ISSR-PCR最佳扩增程序。反应程序:94℃预变性2 min,94℃变性1 min,51℃退火1 min(视不同引物而定),72℃延伸1.5 min,共41个循环,72℃延伸10 min。通过对ISSR-PCR最佳反应体系和最佳扩增程序的验证,发现该反应体系和扩增程序具有较高的稳定性和较好的重复性。