红三叶ISSR-PCR反应体系的建立与优化

编号 zgly0001627052

文献类型 期刊论文

文献题名 红三叶ISSR-PCR反应体系的建立与优化

作者 孟丽娟  赵桂琴 

作者单位 甘肃农业大学草业学院/草业生态系统教育部重点实验室/甘肃省草业工程实验室/中-美草地畜牧业可持续发展研究中心 

母体文献 草原与草坪 

年卷期 2015年02期

年份 2015 

分类号 S541.2 

关键词 红三叶  ISSR-PCR  正交优化 

文摘内容 采用正交试验设计,对影响红三叶ISSR-PCR反应较大的4个因素(Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTP及引物)在4个水平上进行筛选,建立并优化了适合红三叶ISSR分析的最佳反应体系。在25μL反应体系中各反应物的最适含量为40ng模板DNA,10×PCR-buffer 2.5μL,2.5 mmol/L Mg2+,2.5UTaq DNA聚合酶,引物1μmol/L,0.2mmol/L dNTP。反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性30s,引物退火30s,72℃延伸1min,循环35次;72℃延伸7min,4℃保存。优化体系的建立为采用ISSR分子标记技术进行红三叶种质资源遗传多样性分析提供了技术参考。