吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007高GC基因PCR体系的扩增研究

编号 zgly0001565485

文献类型 期刊论文

文献题名 吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007高GC基因PCR体系的扩增研究

作者 张鹏飞  吴伟  陈飞飞  叶建仁  任嘉红 

作者单位 山西师范大学生命科学学院  长治学院生物科学与技术系  南京林业大学林学院 

母体文献 西南林业大学学报 

年卷期 2017年01期

年份 2017 

分类号 Q933 

关键词 吡咯伯克霍尔德氏菌  基因  测序  高GC  PCR扩增 

文摘内容 对生防菌吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007基因组上高GC基因PCR扩增体系进行探讨。通过对该菌株基因组进行100℃处理5 min;PCR反应体系为10μL,在体系中使用高保真LA Taq(Mix)酶,并分别加入不同体积分数的DMSO、2×GC bufferⅠ、2×GC bufferⅡ,然后选用适当的PCR程序对产几丁质酶基因(bcc1,GC含量71.1%)进行扩增,在此基础上,选择最适体系对产ACC脱氨酶基因(acd S,GC含量66.86%)、内切葡聚糖酶基因(GC含量74.71%)、色氨酸单加氧酶基因(iaa M,GC含量6.62%)、嗜铁素合成相关基因(cepR,GC含量64.44%)进行PCR扩增,将扩增出的片段与PMD19-T vector连接后转化至大肠杆菌JM-109中进行测序。结果表明:JK-SH007菌株基因组经高温处理后,在PCR反应体系中加入10%DMSO可成功扩增出该菌株bcc1基因(2 484 bp)。该体系同样适用于acd S、内切葡聚糖酶、iaa M、cepR等基因,而且测序结果与预期的序列一致。因此,该体系具有广泛性,而且简单可靠,成本低,扩增效率高,具有很强的实用性,为洋葱伯克霍尔德氏菌群菌株及其他菌株高GC含量基因的克隆提供了参考依据。