高GC含量青枯菌aac基因PCR扩增体系的建立与优化

编号 zgly0001338275

文献类型 期刊论文

文献题名 高GC含量青枯菌aac基因PCR扩增体系的建立与优化

作者 张争  张杨  徐进  许景升  何礼远  冯洁 

作者单位 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点试验室 

母体文献 植物保护 

年卷期 2008年02期

年份 2008 

分类号 S432.4 

关键词 高GC  PCR  正交试验 

文摘内容 通过添加增效剂、正交试验设计优化PCR反应体系、联合采用多种PCR程序等措施,建立并优化了PCR扩增体系,成功地从高GC青枯菌基因组中扩增出了长度为2 434 bp且GC含量高达70.9%的aac基因。PCR反应体系为20μL包括5%DMSO2、.5 mmol/L MgCl2、500μmol/L dNTP、10 pmol/L引物1、.25 UTaq酶、50 ng模板DNA。首先采用热启动PCR:95℃5 min,保持80℃,加入Taq酶;然后采用二步PCR:5个循环包括变性95℃1 min,65℃1 min;最后采用降落PCR:30个循环为95℃1 min,78℃1 min,每个循环降低0.5℃,72℃3 min;补充10个循环为95℃1 min,63℃1 min,72℃3 min;72℃10 min。该试验体系的建立与优化为研究高GC含量生物的基因功能提供了方法。