杜鹃花SCoT-PCR反应体系的优化及引物筛选

编号 zgly0001639783

文献类型 期刊论文

文献题名 杜鹃花SCoT-PCR反应体系的优化及引物筛选

作者 郑福超  耿兴敏  谷康  闫娜  罗凤霞  肖丽燕 

作者单位 南京林业大学风景园林学院  金陵科技学院园艺学院 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2018年11期

年份 2018 

分类号 S685.21 

关键词 杜鹃花  SCoT  PCR  单因子  正交试验 

文摘内容 本试验以马银花（R.ovatum）DNA为模板,采用L16（45）正交试验对目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应（SCoT-PCR）体系中5因素(Taq聚合酶用量,Mg2+浓度,模板DNA用量,dNTPs浓度,引物浓度)进行了优化,建立了杜鹃花植物SCoT-PCR反应体系。结果表明,在20μL的反应体系中,模板DNA 1.00 ng/μL,Mg2+为3.00 mmol/L,dNTPs为0.25 mmol/L,引物为0.50μmol/L,Taq DNA聚合酶为2.00 U。比较了各因素对反应体系的影响,发现引物物浓度的差异对体系影响显著,各因素影响的先后顺序为引物>Taq DNA聚合酶>dNTPs>Mg2+>模板DNA。并运用了杜鹃属的4个不同种对最优体系进行了稳定性验证,选择了10个通用性的引物进行筛选,发现10个引物均能扩增出条带,其中有6个引物能够得到清晰可辨、多态性丰富的条带。该体系的建立将为杜鹃花遗传多样性、差异基因的表达分析,分子辅助育种、遗传图谱构建等研究提供技术支持。