濒危植物夏蜡梅ISSR扩增条件的优化

编号 zgly0000538021

文献类型 期刊论文

文献题名 濒危植物夏蜡梅ISSR扩增条件的优化

作者 金则新  李钧敏 

作者单位 台州学院生态研究所 

母体文献 植物研究 

年卷期 2007,27(1)

页码 68-72

年份 2007 

分类号 S667.6 

关键词 夏蜡梅  ISSR  优化  遗传多样性 

文摘内容 为了确保ISSR分析结果的可靠性和重复性，有必要进行ISSR—PCR反应体系的优化。以濒危植物夏蜡梅的基因组DNA为研究对象，利用单因素试验，测试了ISSR—PCR反应体系中镁离子，dNTP，模板DNA含量，Taq DNA聚合酶量、BSA浓度、引物浓度、甘油浓度等7种因素对反应结果的影响，经过优化实验，建立了夏蜡梅ISSR—PCR最佳反应体系：10μL PCR反应体积，1×Taq酶配套缓冲液(10mmol·L^-1 Tris·HCl pH9．0，50mmol·L^-1 KCl，0．1％Triton X-100)，1．5mmol·L^-1 MgCl2，0．75U Taq酶(上海华美公司)，20ng模板DNA，6pmol引物(上海Sangon公司)；dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0．15mmol·L^-1。利用优化反应体系从100个ISSR引物中共筛选出12个稳定性好、重复性高的引物，对10个居群共200个夏蜡梅个体的DNA进行扩增，共扩增出156个条带，其中多态条带为114个，总的多态位点百分率为73．08％。各居群的多态位点百分率有较大差异，平均为23．65％。夏蜡梅ISSR反应体系的建立为利用ISSR分子标记技术研究夏蜡梅的遗传多样性奠定了良好的基础。