牛膝ISSR—PCR反应体系的优化

编号 zgly0000744880

文献类型 期刊论文

文献题名 牛膝ISSR—PCR反应体系的优化

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 王强  金则新  祁彩虹  李钧敏  彭礼琼 

作者单位 上海师范大学生命与环境科学学院  台州学院生态研究所 

母体文献 江苏农业科学 

年卷期 2011(5)

页码 24-26

年份 2011 

分类号 S567 

关键词 牛膝  ISSR  优化  遗传多样性 

文摘内容 采用改进的SDS法提取牛膝(Achyranthesbidentata)基因组DNA, 利用单因素试验对ISSR反应体系中的Mg^2+浓度、dNTP浓度、模板DNA用量、TaqDNA聚合酶用量、BSA浓度、引物用量进行筛选和优化, 得出了适用于牛膝ISSR分析的扩增条件: 10μL PCR反应体积, 1×Taq酶配套缓冲液(200mmol/LTris·HCl, pH值8.8, 100mmol/LKCl, 1%TritonX一100, 100mmol/L(NH4)2s04, 15mmol/LMgCl2), 1.5UTaqDNA聚合酶, 2mg/mLBSA, 15ng模板DNA, 10pmol引物, 0.5mmol/l。dNTP, 2.0mmol/LMg^2+。利用优化反应体系从100个ISSR引物中筛选出12个重复性好、稳定性高的引物对24个牛膝个体的DNA进行扩增, 共得到85个位点, 其中74个为多态位点, 多态位点百分率为87.06%, Nei指数为0.3303, Shannon信息指数为0.4905, 表明牛膝的遗传多样性处于较高水平。