绿色荧光蛋白基因标记野生型生防枯草芽孢杆菌的研究

编号 zgly0000310706

文献类型 期刊论文

文献题名 绿色荧光蛋白基因标记野生型生防枯草芽孢杆菌的研究

作者 姚震声  陈中义  陈志谊  郑小波  张杰  黄大昉 

作者单位 中国农业科学院植物保护研究所 

母体文献 生物工程学报 

年卷期 2003,19(5)

页码 551-555,T002

年份 2003 

分类号 S476  Q78 

关键词 绿色荧光蛋白基因  重迭PcR  枯草芽孢杆菌  生物防治  基因工程 

文摘内容 根据绿色荧光蛋白基因和枯草芽孢杆菌木糖诱导型启动子PxylR序列, 分别设计两对特异引物primers PxyF/R和primers gfpF/R, 扩增获得了完整的启动子PxylR和gfp基因序列。进一步以上述产物混合物为模板, 以primer PxyF/primer gfpR做引物进行重迭PCR, 获得了PxylR-gfp重组翻译融合表达盒。经sphI和KpnI完全酶切后, 将PxylR-gfp表达盒分别插入大肠杆菌-苏云金芽孢杆菌穿梭载体pHT315和大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pRP22。相应的重组表达质粒pGFP315和pGFP22转化枯草芽孢杆菌感受态细胞。前者在标准菌株168中得到良好发光表型, 后者则在标准菌株168和野生目标菌株B916中均得到良好的发光表型。室内平板抑菌实验结果显示B916生防效果与出发菌株没有明显差异, 遗传稳定性研究表明连续稀释培养约175代后, 工程菌株稳定性为94%, 质粒丢失频率低于3.5×10^-4/代。