鳞翅目成虫乙醇保存标本基因组DNA的提取及在微卫星研究中的应用

编号 zgly0001371037

文献类型 期刊论文

文献题名 鳞翅目成虫乙醇保存标本基因组DNA的提取及在微卫星研究中的应用

作者 张国彦  翟保平 

作者单位 南京农业大学昆虫学系  农业部病虫害监测与治理重点开放实验室  河南省植物保护植物检疫站 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2009年03期

年份 2009 

分类号 Q96 

关键词 鳞翅目东方粘虫  DNA提取  微卫星  基因分型 

文摘内容 高质量的基因组DNA样品是分子生态学研究的先决条件。本研究目的在于探索从东方粘虫Pseudaletia separata(Walker)成虫自然种群的乙醇保存标本中分离高质量基因组DNA的有效方案。在2mL微型离心管中进行4种提取方案的实验比较,结果发现采用传统的苯酚抽提方法的2种方案提取腹部中段组织的基因组DNA,样品合格率只有7.69%～40%。但是,如果在苯酚抽提以前加入高浓度盐和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB),就会使DNA样品合格率达到68.42%～95.28%,而且DNA平均产量达到5.59～10.04mg/g,明显高于前者的2.83～5.78mg/g(统计检验表明,在不同种群中差异显著或不显著)。研究结果还证明腹部组织比胸部组织更适宜提取DNA。对来自一个自然种群的99头东方粘虫DNA合格样品的统计分析表明,DNA提取总量(μg)与组织样品用量(mg)之间存在弱的正相关关系,平均DNA提取量(mg/g)与组织样品用量(mg)之间存在中度负相关关系。总之,在2mL微型离心管中,用10～20mg腹部组织,利用CTAB+苯酚抽提方法可以获得高纯度和高含量的基因组DNA样品。用该方案提取的基因组DNA能够顺利地进行微卫星位点的分离和基因分型。