β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因在粟酒裂殖酵母中的表达及功能分析

编号 zgly0000807214

文献类型 期刊论文

文献题名 β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因在粟酒裂殖酵母中的表达及功能分析

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 付永平  李博  王丕武  夏海丰  张卓 

作者单位 吉林农业大学农学院  吉林市农业科学院 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2012(12)

页码 171-176

年份 2012 

分类号 Q939.97 

关键词 绿色木霉  β-葡萄糖苷酶  粟酒裂殖酵母  酶学活性 

文摘内容 【目的】:克隆绿色木霉β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因,并在粟酒裂殖酵母细胞中进行表达分析。【方法】:利用PCR技术,从绿色木霉中克隆纤维素酶β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因的DNA序列,再通过XhoⅠ和NotⅠ2个酶切位点与粟酒裂殖酵母表达载体pREP5N连接,构建酵母真核表达载体,利用电转化方法转化粟酒裂殖酵母SP-Q01细胞,并在SP-Q01中进行表达分析,最后采用DNS法测定表达产物的酶学活性。【结果】:PCR扩增得到2 380bp的bglⅠ基因序列,包括完整的CDS序列和信号肽序列,编码序列与已报道的里氏木霉纤维素酶基因序列相似性为100%;对酵母转化子进行诱导培养后,SDS-PAGE电泳检测得到大小为76ku的目的蛋白条带,在SP-Q01细胞中重组酶活性最高达155U/mL,最佳培养时间为72h,产生酶活的最适温度为60℃。【结论】:成功克隆出了绿色木霉β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因的DNA序列,该基因能在粟酒裂殖酵母细胞中成功表达,为绿色木霉β-葡萄糖苷酶bglⅠ基因的深入研究和应用奠定了基础。